九九精品99久久久香蕉,中文无码AV一区二区三区,精品一区二区三区无码免费直播,japanese老熟妇乱子伦视频

產(chǎn)品中心PRODUCTS CENTER
技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > ibidi µ-Slide VI 0.4 免疫熒光實(shí)驗,四步簡單操作,小白也輕松上手!

ibidi µ-Slide VI 0.4 免疫熒光實(shí)驗,四步簡單操作,小白也輕松上手!

更新時間:2023-07-10   更新時間:2023-07-10   點(diǎn)擊次數(shù):1314次

  免疫熒光技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。本文將介紹免疫熒光實(shí)驗的新方法;此文將描述在通道載玻片內(nèi)培養(yǎng)大鼠成纖維細(xì)胞(Rat1)的單個實(shí)驗案例。然后再用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽染色F-肌動蛋白細(xì)胞骨架,并用DAPI對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染。  

  

58e9b15026fa1994f07e32cd074a6857.jpg

  

  細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗包括四個主要步驟:

  

7f8da2af79d0c2475ba6545ac4c2b9df.png

   

  1、培養(yǎng)

  

  • 在無菌條件下打開 μ-Slide VI 0.4、ibiTreat (80606) 的包裝,并將其放在 μ-Slide 架 (80003) 上。

  

  • 在每個通道中加入 30 μl 3x105細(xì)胞/ml 大鼠成纖維細(xì)胞(Rat1)細(xì)胞懸液。如下圖所示或我們的網(wǎng)站上所示,直接將移液器加入通道。  

  

df5e836459a27d19c63ba9601a36ea96.png

  

  • 用隨附的蓋子蓋住。

  

  • 將載玻片放入培養(yǎng)箱 (37 °C; 5% CO2) 培養(yǎng)并讓細(xì)胞附著 (60 分鐘)。然后用 60 μl 無細(xì)胞培養(yǎng)基填充兩個通道口。

  

  • 孵育過夜。

  

  2、固定和透化

  

  在固定和透化過程中要小心,通道永遠(yuǎn)不要變干!通過用下一個沖洗剩余的溶液來交換通道中的液體

  

  固定:

  

  • 使用細(xì)胞培養(yǎng)抽吸裝置從所有通道口中吸出培養(yǎng)基。用 Dulbecco PBS 洗滌細(xì)胞,方法是將 200 μl 緩慢加入每個通道的一個空通道口,并從每個通道的相對通道口吸出。不要吸出整個通道體積。

  

  • 用約 100 μl 3.7% 多聚甲醛的 PBS 固定細(xì)胞。20 分鐘后,通過用 200 μl PBS 填充一孔并從另一孔中吸出來沖洗通道內(nèi)的液體;確保通道-不干涸。

  

  透化和封閉:

  

  • 如上所述,用 200 μl PBS 再次洗滌細(xì)胞。

  

  • 在 PBS 中用 ~100 μl 0.1% Triton® X-100 3-5 分鐘。

  

  • 用 PBS 洗滌細(xì)胞。

  

  • 用 ~100 μl 封閉溶液(PBS 中的 1% BSA)20 分鐘。

  

  • 用 PBS 洗滌細(xì)胞。

  

  3、染色

  

  • 使用抽吸裝置從通道中取出所有液體。不要讓通道變干。

  

  • 吸液后立即加入 30 μl Alexa Fluor® 488 鬼筆環(huán)肽(在 200 μl PBS 和 1% BSA 中)。用 1 毫升注射器注射溶液會有所幫助。在室溫下孵育 20 分鐘。

  

  • 用 PBS 洗滌細(xì)胞。

  

  • 用 30 μl DAPI (0.1 μg/ml) 3-5 分鐘。

  

  • 用 PBS 清洗細(xì)胞并應(yīng)用 ibidi 封固培養(yǎng)基,直到通道被填滿(約 50 μl)。ibidi 封固劑以甘油為基礎(chǔ),并含有用于抗褪色的 DABCO。載玻片可存放約4 周。

  

  4、成像

  

  在熒光顯微鏡下選擇適當(dāng)?shù)臑V鏡,也可以使用浸油觀察細(xì)胞。  

  

fc21f585fc9c29df0cf03f96113fa4ce.png

  

  之所能如此簡便完成免疫熒光實(shí)驗,是因為這些ibidi培養(yǎng)皿和載玻片的底部為特殊處理的材質(zhì),絕大多數(shù)細(xì)胞可以直接貼壁生長,而不需要另外包被。同時,這些耗材的底部薄如蓋玻片,可以直接使用倒置顯微鏡進(jìn)行觀察,得到高質(zhì)量的成像,適用于顯微鏡比如共聚焦顯微鏡。

  

  實(shí)驗例子:

  

  超分辨率顯微鏡 (STED)觀察肌動蛋白細(xì)胞骨架

  

  μ-Slide VI 0.4與超分辨率顯微鏡方法兼容,使用 LifeAct-TagGFP2 蛋白,可以詳細(xì)觀察肌動蛋白細(xì)胞骨架。在這個實(shí)驗中,固定的 Rat1 成纖維細(xì)胞與 LifeAct-TagGFP2 蛋白一起在 μ-Slide VI 0.4,ibiTreat中孵育。并用 STED 顯微鏡以創(chuàng)建超分辨率圖像。  

  

7089c91201fa7622d4de280361b2f26f.jpg

  

  使用LifeAct-TagGFP2 蛋白對 Rat1 成纖維細(xì)胞中的肌動蛋白細(xì)胞骨架進(jìn)行超分辨率顯微鏡檢查。使用 Plan-Neofluar 100x/1.4 物鏡在 STEDYCON 超分辨率 STED 納米顯微鏡系統(tǒng)(Abberior Instruments GmbH,德國哥廷根)上進(jìn)行顯微鏡檢查。

  

  μ-Slide VI 0.4用于獲取人 BJ 成纖維細(xì)胞的共聚焦圖像。用 Drp-1 siRNA 轉(zhuǎn)染細(xì)胞并用 MitoTracker Red 染色以觀察融合的線粒體。在 ibidi μ-Slide VI 0.4中培養(yǎng)的人 BJ 成纖維細(xì)胞的共聚焦顯微鏡圖像。MitoTracker Red(紅色)用于可視化線粒體。

  

87fca11e190f57f70c2e6bb4a931cb5f.jpg

聯(lián)


寡妇好丰满奶好大有声小说| av电影网站| 免费无码一区二区三区蜜桃大 | 色妞ww精品视频7777| 亚洲成A人无码| 久久啪久久全部精品| 无码国内精品久久人妻| 国产AV办公室丝袜系列| 国产乡下妇女做爰| 亚洲色偷偷综合亚洲AVYP| a片毛片免费看| 日本乱偷人妻中文字幕在线| 午夜成人理论福利片| 人妻含泪让粗大挺进| 少妇荡乳情欲办公室456视频| 久久国产精品波多野结衣AV | 日本免费无码一区二区到五区| 久久久久波多野结衣高潮| 美女露100%双奶头无遮挡| 邪恶工番口番大全邪恶帝| 日本三级吃奶头添泬播放| 99无码人妻一区二区三区免费| 中文字幕精品久久久久人妻| 丝瓜视频在线观看| 午夜无码乱码在线观看| 亚洲AV无码久久寂寞少妇| 少妇与大狼拘作爱性a片| 少妇大叫太大太粗太爽了a片小说| 亚洲AV人无码激艳猛片服务器| 国产成人A∨激情视频厨房| 国产午夜精品一区二区三区漫画 | 一本一道AV无码中文字幕﹣百度| 麻豆亚洲AV熟女国产一区二| 日产一二三区别免费必看| 熟女av| 天堂在/线资源中文在线| 真人做人试看60分钟免费视频| 校花被迫撑开颤抖高潮求饶| 无码少妇一区二区三区芒果| 午夜精品一区二区三区在线视| 超h公用妓女精便器系列小说|